7.转移上清到一个Vacutainer血液收集管,用等体积的酚:氯仿抽提,在- -一个旋转台上摇动5min。4552g, 20'C 离心10min (J6-MI Beckman-Coulter离心机,JS-4.2 转子)。
8.转移上层水相到另一个微量离心管中。加入2体积的100%乙醇,轻轻地混匀。4552g,4'C离心30min (J6-MI Beckman-Coulter离心机,JS-4.2 转子),收集DNA。
微型离心机多少钱9.丢弃上清,用70% (VV)乙醇洗涤沉淀。室温风干沉淀10min。将沉淀重悬于200μL的1XTE缓冲液中。
10.根据生产商的说明书准备Chroma Spin+ TE-400离心柱。小心并缓慢加入DNA样品到柱子的中心。不要使样品沿着柱子的侧壁流过。将柱子和管子以700g,4'C 离心5min(J6-MI Beckman-Coulter离心机,JS-4.2转子) 。
微型离心机多少钱11.在管中加入750μL 100%乙醇和100uL 7.5mol/L 乙酸铵。混合均匀,将管子放到-80C冰箱中10min。在微型离心机中,20 617g (14 00r/min),4C离心30min。
12. 丢弃上清液,用70% (VV)乙醇洗涤沉淀。室温风干沉淀10min。 用13μL TE缓冲液重悬沉淀。将DNA存放于-20C。
13.为了确定DNA的浓度,将1μL样品、9μL 1XTE和1μL凝胶加样缓冲液II混合。