离心机2000转速

新鲜配制的溶菌酶的碱裂解液I,轻拍管壁使内容物混合。冰浴Smin,继续步骤4.

4.在管中加入200mL新配制的碱裂解液II。盖紧盖子，快速颠倒混合5次。不要振荡。混合后置于冰上2min。

5.在管中加入150mL冰冷的碱裂解液II。盖紧盖子，颠倒混合数次，使碱裂解液II与黏稠的细菌裂解物混合，置于冰上3~5min。

6.在微量离心机上，将细菌裂解物以最大转速4C离心5min.将上清转移至新的微量离心管中。M13噬菌体复制型DNA的纯化离心机2000转速

7.加入等体积酚：氯仿。振荡混合有机相和水相，以最大转速离心2~ 5min。将水相(.上层)转移至新的微量离心管中。.

8.加入2倍体积的乙醇沉淀双链DNA。振荡混合，室温放置2min。离心机2000转速

9.微量离心机以最大转速4C离心5min，回收DNA. .

10.轻轻吸去上清。将离心管倒置于吸水纸上，使管中液体流尽，除去吸附于管壁的所有液滴。这一步可以方便地使用一次性移液器头连接一个真空泵来完成。采用弱真空，将移液器头接触液滴表面，吸液时，尽可能使移液器头远离核酸沉淀，吸去管壁上所有液滴。

11.再加一步乙醇沉淀步骤可确保双链DNA可以有效地被限制酶切割。

i.将复制型DNA沉淀溶于100uLTE.

i.加入S0μL 7.5 mol/L乙酸铵(见附录1),充分混合，再加入300uL冰浴的乙醇。

ii.室温放置15smin或20C过夜，在微量高心机上，以最大转速4C离心5~ 10min.小心吸去上清。